動(dòng)物疫病血凝分析儀型號(hào):DY-7000
DY-7000動(dòng)物疫病血凝分析儀廣泛于動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心、動(dòng)物監(jiān)督所、獸醫(yī)藥品監(jiān)察所、獸醫(yī)研究所、大學(xué)、疫苗生產(chǎn)和大中型飼養(yǎng)企業(yè)等單位。
DY-7000動(dòng)物疫病血凝分析儀是根據(jù)國(guó)標(biāo)中重大疫病免疫監(jiān)測(cè)方法研制的設(shè)備,配套使用自動(dòng)血凝分析管理軟件,能自動(dòng)監(jiān)測(cè)常見重大動(dòng)物疫病的免疫抗體效價(jià),及時(shí)掌握動(dòng)物疫病流行規(guī)律和動(dòng)態(tài),建立動(dòng)物免疫效果監(jiān)測(cè)記錄檔案。系統(tǒng)當(dāng)前監(jiān)測(cè)項(xiàng)目有:豬瘟抗體正向間接血凝檢測(cè)、口蹄疫抗體正向間接血凝檢測(cè)、致病性禽流感H5亞型抗體血凝抑制檢測(cè)、致病性禽流感H7亞型抗體血凝抑制檢測(cè)、致病性禽流感H9亞型抗體血凝抑制檢測(cè)、新城疫抗體血凝抑制檢測(cè)。
試驗(yàn)方法:
1 血凝(HA)試驗(yàn)
1) 在V型微量反應(yīng)板的1~12孔均孔加入0.025ml PBS,換滴頭。
2) 吸取0.025ml血凝抗原加入孔,混勻。
3) 從第1孔吸取0.025ml血凝抗原加入第2孔,混勻后吸取0.025ml加入第3孔,如此進(jìn)行對(duì)倍稀釋至第11孔,從第11孔吸取0.025ml棄去,換滴頭。
4) 每孔再加0.025ml PBS。
5) 每孔均加入0.025ml 1%(V/V)雞紅細(xì)胞懸液(將雞紅細(xì)胞懸液充分搖勻后加入)。
6) 將反應(yīng)板在振蕩器上震蕩1~2分鐘或輕扣反應(yīng)板混合反應(yīng)物,在室溫(20~25℃)下靜置40分鐘后觀察結(jié)果,(如果環(huán)境溫度太高,可置4℃環(huán)境下),在對(duì)照孔紅細(xì)胞顯著呈鈕扣狀時(shí)判定結(jié)果。
7) 結(jié)果判定 將板傾斜,觀察紅細(xì)胞有無(wú)呈淚滴狀流淌。*血凝(不流淌)的抗原或病毒稀釋倍數(shù)代表一個(gè)血凝單位(HAU)。
2 血凝抑制(HI)試驗(yàn)
1) 根據(jù)HA試驗(yàn)測(cè)定的效價(jià),計(jì)算配制4個(gè)血凝單位(4HAU)抗原。以*血凝的病毒稀釋倍數(shù)作為終點(diǎn),終點(diǎn)稀釋倍數(shù)除以4即為含4HAU抗原的稀釋倍數(shù)。例如,HA效價(jià)為1:256,則4HAU抗原的稀釋倍數(shù)應(yīng)是1:64(256除以4)。
2) 加稀釋液:
在微量反應(yīng)板的第1~11孔加入0.025ml PBS,第12孔加入0.05ml PBS。
3) 稀釋待檢血清:
取1號(hào)待檢血清0.025ml加入排第1孔,充分混勻后吸0.025ml于第2孔,依次對(duì)倍稀釋至第10孔,從第10孔吸取0.025ml棄去。
取2號(hào)待檢血清加入第2排;取3號(hào)待檢血清加入第3排……均按上法稀釋。
注意!每取一份血清時(shí),必須更換吸頭。
4) 稀釋陰性血清:
在血凝板的第7排孔加陰性血清0.025ml,對(duì)倍稀釋至第3孔,混勻后從該孔取出0.025ml棄去。
5) 稀釋陽(yáng)性血清:
在血凝板的第8排第1孔加陽(yáng)性血清0.025ml,對(duì)倍稀釋至第10孔,混勻后從該孔取出0.025ml棄去。
6) 第1~11孔均加入含4HAU混勻的病毒抗原液0.025ml,在室溫(20~25℃)下靜置30分鐘或2~8℃ 50分鐘。
7) 每孔加入0.025ml 1%(V/V)的雞紅細(xì)胞懸液,震蕩混勻,在室溫(20~25℃)下靜置20~30分鐘或2~8℃ 45~60分鐘,對(duì)照紅細(xì)胞將呈明顯鈕扣狀沉于孔底。
結(jié)果判定
以*抑制4 HAU抗原的血清稀釋倍數(shù)判為該血清的HI效價(jià)。
只有陰性對(duì)照孔血清滴度不大于2log2,陽(yáng)性對(duì)照血清誤差不過(guò)1個(gè)滴度,試驗(yàn)結(jié)果才有效。
禽流感滅活疫苗的免疫效果判定:家禽免疫后21天進(jìn)行免疫效果監(jiān)測(cè)。禽流感抗體血凝抑制(HI)抗體效價(jià)≥24判定為合格
存欄家禽抗體合格率達(dá)到≥70%判定為合格。
新城疫免疫效果監(jiān)測(cè):免疫21天后,進(jìn)行免疫效果監(jiān)測(cè)。抗體血凝抑制試驗(yàn)抗體效價(jià)≥25判定為合格
存欄家禽抗體合格率達(dá)到≥70%判定為合格。
【注意事項(xiàng)】
(1)HA和HI試驗(yàn)影響因素甚多,應(yīng)嚴(yán)格控制試驗(yàn)條件。每加一試劑或樣品后需更換吸頭,同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格控制作用溫度和時(shí)間。
(2)準(zhǔn)確配制紅細(xì)胞懸液,使用時(shí)應(yīng)隨時(shí)振搖。
(3)用pH值7.0~7.2的PBS作為稀釋液。
(4)抗原和陰、陽(yáng)性血清若有污染,應(yīng)廢棄。
(5)準(zhǔn)確配制4HAU抗原,使用前需進(jìn)行滴定,滴定好的抗原應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)用完。
(6)抗原和血清按規(guī)定保存。凍干試劑應(yīng)按規(guī)定的體積用PBS溶解。溶解后2~8℃保存不過(guò)1個(gè)月;可分裝成小包裝,-70℃凍存,隨用隨取。切忌反復(fù)凍融。
(7)鴨、鵝以及哺乳動(dòng)物的血清一般需進(jìn)行非特異性凝集和抑制素的處理。
(8)同一亞型不同毒株的HI試驗(yàn)抗原,若抗原性存在差異,則檢測(cè)同一血清的HI效價(jià)不同。
(9)在使用微量加樣器時(shí),槍頭進(jìn)入試劑瓶面下約2~3ml深處,不可過(guò)深。待槍頭撤出液面后斜貼在試劑瓶的瓶壁上,淌走多余的液體,防止形成液滴滴入凝集板孔中。
(10)雞紅細(xì)胞懸液好是現(xiàn)配現(xiàn)用,剩余的放于4℃保存,如果出現(xiàn)溶血現(xiàn)象則不能使用。
(11)每次檢測(cè)可只做一份陰陽(yáng)性血清對(duì)照試驗(yàn)。
(12)試驗(yàn)完成后好立即上機(jī)判讀,否則易出現(xiàn)紅細(xì)胞下滑現(xiàn)象。
(13)凍干對(duì)照血清和抗原存放于-20℃,溶解過(guò)后存放于4℃。